扶正化瘀方对肝硬化血氨基酸失衡的调节作用及其意义

上海市中医药研究院肝病研究所（上海 200032）
胡义杨 刘成 刘平 沈松法 徐列明 朱剑亮 薛惠明 毛泉明

    血氨基酸平衡失调在肝硬化发展过程中的重要作用已经到众多学者的重视，应用特殊氨基酸制剂己成为肝硬化治疗的手段之一。近年来，已有不少研究结果肯定了扶正化瘀法在肝硬化治疗中的作用,然而中药对肝硬化氨基酸失衡的调节作用如何尚未见报道。为此，我们从动物实验和临床上对其进行了观察。

实验研究

    一、材料和方法

    1.动物 Wistar成年雄性大鼠77只,体重170~230g，由上海放射生物研究所提供。
    2.动物模型 采用四氯化碳（CCl4）高脂低蛋白复合因素大鼠肝硬化模型。
    3.药物制备及用法 扶正化瘀方（由人工虫草菌丝、桃仁、丹参等6味药组成，又名319方）由上海中华制药厂协助制成流浸膏，每克流浸膏相当于生药3.53g,临用时用蒸馏水将流浸膏稀释成3.4%的药液（即生药含量12%），以10ml/100g鼠重/日的剂量给大鼠饮用，饮完后再予自来水。该用药量为成人（60kg体重计）单位体重用药量的30倍。

    4.分组

    （1）预防实验组 37只,分正常组(10只),模型组（13只），预防组（14只）。预防组在造模同时即给药，至第6周在禁食12h后将大鼠断头处死取材。

    （2）治疗实验组 40只，其中正常组10只,另30只完成6周造模后停用CC14,并用正常饲料。另将生存的肝硬化模型鼠按体重配对分为对照组（12只）和治疗组（10只），治疗组开始给药。持续治疗30天后，禁食12h,然后处死各组大鼠,取材。

    5.观察项目与方法

    （1）一般项目 ①血清白蛋白含量、ALT活性：采用常规方法测定。②肝组织羟脯氨基酸（Hyp）含量：:采用kivirikko等的方法测定。③病理组织光镜观察：:肝组织石蜡切片分别作HE染色和武兆发改良的Mallory氏法胶原染色。
    （2）血清游离氨基酸谱分析：采用Beckman6300型氨基酸自动分析仪检测。

    二、结果

    1.预防实验结果
 
    （1）预防实验大鼠肝功能、肝Hyp检测结果见表1。.


    （2）预防试验组肝组织病理变化 参照文献有关脂肪变性程度（0~IV级）和胶原纤维增生程度（0~Ⅲ级）分级标准进行统计处理比较。其脂肪变性程度：按0~IV分级，模型组8例中分别为0、2、1、4、1例；预防组10例中分别为2、4、2、2、1例，明显轻于前者（Ridit检验P＜0.05）。胶原纤维增生程度：按0~Ⅲ分级，模型组分别为0、0、4、4例，预防组分别为1、2、5、2例，似预防组略轻（0.05＜P＜0.1）。

    （3）预防实验各组血清氨基酸变化 与正常组比较，检测出的12种氨基酸中，甘氨酸、丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸、蛋氨酸等各组间无显著性差异。但模型组的支链氨基酸（亮氨酸、异亮氨酸和颉氨酸，BCAA）均显著降低，芳香组氨基酸（AAA）中的酪氨酸（Tyr）增高，因而支/芳（BCAA/AAA）显著降低。预防组和模型组比较，两者BCAA无显著差异，但AAA中，预防组酪氨酸含量显著下降，从而其BCAA/AAA显著上升（见表2）。此外，正常组、模型组、预防组的血氨含量分别为8.524±2.150、12.166±2.170、10.780±2.985nmol/50μl，模型组氨浓度显著高于正常组，而预防组无显著差异。

    2.治疗实验结果
    （1）治疗实验大鼠肝功能和肝组织Hyp检测结果 见表3。

    （2）治疗试验组肝组织病理变化 去除病因后动物有自愈倾向。尽管如此,治疗组的病理组织学改变和修复仍较对照组为优，有2例己接近恢复正常,其胶原纤维增生程度较对照组轻,按0~Ⅲ级标准,对照组12例中，分别为0、8、3、1例，而治疗组9例中分别为1、8、0、0例，两组间有显著性差异（P＜0.05）。

    （3）治疗实验各组血清氨基酸谱变化 停止致病因素刺激30天后，两组支链氨基酸与正常组均无显著差异。但芳香组氨基酸中酪氨酸含量：对照组（8只）为3.03±0.62nmol/50μl，明显高于正常组（8只）2.25±0.22 nmol/μl；治疗组（8只）酪氨酸含量为2.47±0.19 nmol/50μl，虽也高于正常组（P＜0.05），但下降较对照组明显（P＜0.05）。BCAA/AAA比值：对照组与治疗组分别为2.69±0.15和2.88±0.17，都低于正常组3.33±0.29（P＜0.001），但两组比较以后治疗组回升幅度为大（P＜0.05）。

临床观察

    一、 对象和方法

    观察对象为经临床确诊的住院治疗的男性肝炎后肝硬化患者。随机分成治疗组（23例）与对照组（20例）,前者服用扶正化瘀319方制成的胶囊（每粒含量相当于生药1.6g），每日15粒，分3次口服。两组同时服用VitC600mg/d与复方VitB6片/d，有腹水者除控制钠的摄入外，酌情口服利尿剂，并发感染者，予相应抗生素等对症治疗。观察期间两组均不予任何蛋白制剂和氨基酸制剂。观察疗程3个月。观察项目和方法：（1）血清白蛋白含量，蛋白电泳。（2）血浆氨基酸谱，采用GILSON高效液相测定。

    二、 结果

    1. 治疗前后患者血清白蛋白、γ-球蛋白的变化

    (1)白蛋白含量 治疗前,治疗组和对照组分别为3.11士0.39g /dl和3.19士0.62g/dl；治疗后,治疗组提高了0.485士0.454g/d1,而对照组仅提高0.086士0.512,两组有显著差异(P＜0.05）。
    (2)γ-球蛋白 治疗组和对照组在治疗前分别为37.75土7.01和35.24士8.39g/dl,治疗后下降幅度分别为5.13士4.35和1.58士4.61g/dl,治疗组似略优于对照组。

    2. 治疗前后血浆氨基酸BCAA/AAA比值的变化 其中14例患者（治疗组和对照组各7例）进行了治疗前后氨基酸测定，结果显示：治疗前两组BCAA/AAA比值均明显低于正常者，但两组间无差异。治疗后，治疗组明显回升（7例中6例上升，1例轻微下降），而对照组仍略有下降趋势（7例中1例上升,1例不变，5例下降）。两组治疗前后差值比较，有显著性差异，见表4。

讨论

    不少研究表明,肝硬化患者氨基酸平衡失调,其变化规律主要在于芳香族氨基酸（AAA）升高，支链氨基酸(BCAA)水平低下,因而导致BCAA/AAA比值严重下降。本文临床观察结果与其相同。值得注意的是，实验发现：CCl4肝硬化模型的血氨基酸谱变化相当一致，同时血氨升高。因而，我们认为，该模型对进行肝病氨基酸失衡机制的探讨、纠正肝硬化氨基酸谱药物的筛选以及疗效判断均具有良好的价值。

    临床观察所见，其BCAA/AAA比值严重下降的肝炎后肝硬化患者，经扶正化瘀方治疗后有不同程度的回升，同时白蛋白含量也有提高，明显优于对照组，动物实验中，无论预防实验还是治疗实验，血清白蛋白、ALT、肝组织Hyp含量及肝组织病理变化的各项结果提示，扶正化瘀方有抗肝损伤，保护肝细胞，改善肝功能，抗肝纤维化及促进肝内胶原纤维重吸收的作用；与此同时，该方能抑制BCAA/AAA的下降并促进其回升。因此，从临床和动物实验的观察表明，扶正化瘀方对肝硬化的氨基酸平衡失调有一定的调节和改善作用。一般认为，肝硬化时BCAA减少主要是肌肉等组织对BCAA的利用增多，蛋白质摄入的减少；而AAA增多主要是由于肝脏对苯丙氨酸、酪氨酸清除率降低所致。从动物实验看，扶正化瘀方的作用环节主要在于抑制或降低其增高的酪氨酸（Tyr）含量，从而调节BCAA/AAA比值。通过改善肝脏细胞功能，减少Tyr的生成或促进Tyr的降解，可能是扶正化瘀方对氨基酸失衡调节作用的主要机制。

    目前认为，肝病患者氨基酸BCAA/AAA比值的变化可反映肝组织损害程度，判定治疗效果和判断患者预后，且与肝性脑病的发生有关。有些患者，临床生化指标虽改善，但BCAA/AAA值不回升，病情将继续恶化，反之则预后良好。故BCAA/AAA比值在肝病患者中的变化，在一定程度上比临床常用的生化检测指标可能更能反映肝脏的功能状态。从这个意义上讲，扶正化瘀方对BCAA/AAA的调节作用进一步反映了药物对减轻肝损害程度，改善肝功能的作用，并可能有利于防止肝性脑病的发生。
对氨基酸失衡的调节，目前仍以应用特殊氨基酸制剂作为主要措施之一。本文观察结果启示：从调节肝病氨基酸失衡的角度出发，应用中药可能是目前应用氨基酸制剂之外的另一种有效治疗手段，极有进一步研究的价值；同时也表明，对氨基酸的调节作用可能是扶正化瘀方在肝硬化治疗中发挥有效作用的重要机制之一。

参考文献[略]

(引自中国中西医结合杂志 1993基础理论研究特集 P1936-199)